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mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)


所属分类


货号:

10115


中文名称:

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英文名称:

mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)


纯度

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技术参数

 
  mRNA帽结构可维持mRNA体内稳定性并促进蛋白的翻译,但体外加帽效率受序列、原料纯度、反应条件等多种因素影响。加帽率作为mRNA原液质控的重要标准以及关键质量属性,在研发和生产过程中进行加帽率的准确表征和全面监控对于确保mRNA的质量至关重要!

目前,加帽率常用液相色谱-串联质谱(LC-MS)进行检测,而加帽率检测样品前处理工艺的稳定性,直接决定了mRNA加帽率检测的准确性。如何高效低成本地确保检测的稳定性和准确性呢?

申基生物立足丰富的mRNA分析与深度表征技术平台,特推出 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS),是一款可精准高效对mRNA样品进行前处理的试剂盒(货号:10115),适用于不同加帽工艺、不同类型帽子结构的mRNA样品前处理!
 
产品描述
本产品基于RNase H特异性切割DNA与RNA的杂交双链特性,通过将含有生物素修饰的探针与待测mRNA 5’末端结合,酶切后通过磁珠回收纯化mRNA的5’端短片段,实现LC-MS测定加帽率的前处理过程。
                                                                      图1 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)实验原理
 
产品特点

➡ 适应性好:适用不同加帽工艺、不同类型帽子以及不同型号液质联用系统的样品处理;

➡ 重复性好:方法稳定,重现性良好;

➡ 准确性高:可对不同加帽率水平的mRNA进行检测,准确度高;

 

产品组分
                                                                    
 
案例展示
 
不同实验人员用本试剂盒进行mRNA样品处理,得到12份供试品溶液,然后进行加帽率检测,12份供试品溶液的加帽率检测结果RSD为0.3%;因此,申基mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)方法稳定,重复性良好。
 

图2 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)重复性实验

 

分别取Capped mRNA与unCapped mRNA按照相应的摩尔比例混合配制,得到加帽率为25%,50%,75%,100%的四个水平的供试品溶液,每个水平平行配制三份,考察实测加帽率并计算回收率,结果表明,不同加帽率水平样品的检测准确度均符合要求(回收率:97%-104%)!另外,线性范围验证实验中0%、25%、50%、75%、100%五个点的线性拟合曲线的相关系数为R2=0.9991,线性良好。

                                                                                 

图3 线性范围验证实验拟和曲线图

 

图4 mRNA Capping Rate Pretreatment Kit(LC-MS)
不同加帽率样品检测结果

PS:注意事项 

✅ 10*Reaction Buffer和RNase H为-20℃保存,其余组分为2-8℃保存;

✅ 需自备3’端带biotin基团修饰的杂交探针和75%甲醇;

✅ 反应过程中避免引入其他RNA酶;

✅ 实验器材(如:枪头、产品管等)注意严格使用 RNase Free 用品;

✅ 请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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