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dsRNA Detection Kit


所属分类


货号:

DS0001


中文名称:

/


英文名称:

dsRNA Detection Kit


纯度

/

技术参数

 

产品描述

dsRNA检测试剂盒(货号:DS0001)采用双抗体夹心法原理,偶联生物素-链霉亲和素系统,定量检测样本中的双链RNAdsRNA)含量,检测的dsRNA与其核酸序列无关,长度为60bp及以上。酶标板微孔中包被抗dsRNA抗体,加入样本后孵育洗涤,再加入生物素化检测抗体孵育,形成抗体-抗原-抗体复合物,再次洗涤后加入辣根过氧化酶(HRP)标记链霉亲和素(SA)。经过彻底洗涤后加入底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中dsRNA含量呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),根据标准曲线计算样品中dsRNA浓度。

产品组分

编号

组分

规格

DS0001-A

生物素化检测抗体(100×

120μL

DS0001-B

HRP-链霉亲和素(100×

120μL

DS0001-C

稀释液

30mL

DS0001-D

显色剂

12mL

DS0001-E

终止液

6mL

DS0001-F

浓缩洗涤液(20×

40mL

DS0001-G

dsRNA标准品(无修饰,5ng/μL

10μL

DS0001-H

dsRNA标准品(pUTP修饰,5ng/μL

10μL

DS0001-I

dsRNA标准品(N1-Me-pUTP修饰,5ng/μL

10μL

DS0001-J

dsRNA标准品(5-OMe-UTP修饰,5ng/μL

10μL

DS0001-K

STE buffer

50mL

DS0001-L

反应板

8×12

DS0001-M

封板膜

4

 

实验前准备

  1. 将本次实验所用试剂平衡至室温(1825℃)。
  2. 20×浓缩洗涤液用纯化水按119体积比稀释成洗涤工作液。
  3. 将抗体管、HRP-SA管和标准品管1000rpm在使用前离心30s,以避免管壁及管盖上残留试剂。
  4. 100×生物素化检测抗体100×HRP-链霉亲和素在使用前用稀释液作100倍稀释后使用。
  5. 无修饰、pUTP修饰dsRNA标准品用STE buffer稀释至10.50.250.1250.06250.03120.01560 pg/μL
  6. N1-Me-pUTP修饰dsRNA标准品用STE buffer稀释至210.50.250.1250.06250.03120 pg/μL
  7. 5-OMe-UTP修饰dsRNA标准品用STE buffer稀释至84210.50.250.1250 pg/μL

 

操作流程

1.从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条加盖封板膜后用自封袋密封放回2~8℃

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔加入不同浓度的标准品100μL,样本孔中加入待测样本100μL

3.用封膜封住反应孔,室温下振板(500rpm)反应60min

4.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4

5.标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的生物素化检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,室温下振板(500rpm)反应60min

6.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次。

7.标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的HRP-链霉亲和素100μL,用封板膜封住反应孔,室温下振板(500rpm)反应30min

8.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次。

9.每孔加入单组分底物显色液100μL,用封板膜封住反应孔,室温静置避光反应30min

10.每孔加入终止液50μL,立即进行检测,设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长450nm/650nm)。

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